
Marco teórico: El Virus del Papiloma Humano (VPH) es el principal factor etiológico en el desarrollo del cáncer cérvico-uterino (CaCu) y sus lesiones precursoras, conocidas como lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado (LIEBG) y de alto grado (LIEAG) ó neoplasias intraepitelial cervical (NIC) grados 1-3. En México esta neoplasia continua siendo un problema de salud pública, ya que es la segunda causa de incidencia y mortalidad por cáncer en mujeres. Las tasas de mortalidad en México son mayores en estados del sur de la república, excepto en Yucatán. Los VPH son muy diversos, a la fecha se han descrito más de 200 genotipos virales, de los cuáles 12 son carcinógenos tipo I (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 y 59 ). A nivel mundial, 76% de los caso de CaCu se atribuyen a VPH16 y VPH18. En México VPH18 es menos frecuente que el promedio mundial. Aunque VPH16 y 18 son los principales tipos virales en CaCu en cualquier región del mundo, la frecuencia de otros tipos virales oncogénicos y/o probables oncogénicos, varía de acuerdo a la región geográfica. En el sur de México -Yucatán- se ha reportado que VPH58 es muy frecuente, lo mismo que en Asia. Si bien existen reportes en México sobre la prevalencia y tipos virales de VPH en lesiones cervicovaginales, estos no son del todo comparables debido a diferencias en los métodos de detección y genotipificación utilizados. En este sentido, se han mejorado los métodos de detección, basados principalmente en PCR y secuenciación y/o hibridación. Algunas de las plataformas desarrolladas se enfocan a la detección de tipos virales oncogénicos, mientras que otras pruebas se enfocan a la genotipificación, permitiendo la detección de infecciones múltiples o coinfecciones. El valor clínico de la detección de genotipos de alto riesgo está bien establecido; por ello, se han desarrollado pruebas moleculares para la detección de VPH de alto riesgo, las cuales han sido implementadas como parte de las estrategias de tamizaje en CaCu; sin embargo en nuestra institución aún no han sido incorporadas este tipo de pruebas. Por otra parte, recientemente se ha reportado la presencia de coinfecciones en lesiones cervicales;sin embargo, el papel de las coinfecciones en el desarrollo de lesiones precursoras y en la progresión de CaCu no ha sido definido. Recientemente publicamos un estudio donde identificamos que sólo 65% de los casos de CaCu se atribuyen a VPH 16 y VPH18 y que 63% de las lesiones precursoras (NIC3) presentan coinfecciones, en contraste con 26% de los casos de CaCu. Una análisis preliminar mostró que la coinfección con ciertos tipos virales no oncogénicos parece tener un efecto protector. Estos datos plantean varias interrogantes: ¿Cuál es el papel de las coinfecciones en la progresión de lesiones precursoras y CaCu? ¿Existen diferencias en cuanto a prevalencia y genotipos de VPH en distintas regiones geográficas de México?
Objetivos generales:
• Implementación de pruebas moleculares para el tamizaje del cáncer cérvicouterino.
• Identificar los genotipos virales y presencia de coinfecciones en mujeres con y sin lesiones cervicovaginales de distintas regiones de México y su relación con la progresión neoplásica.
Materiales y métodos: Se colectarán muestras cérvico-vaginales, las cuales serán preservadas y fijadas (Preservcyt) en cada centro participante: Monterrey Nuevo León, Tamaulipas, Baja California, Metepec Puebla, CDMX, Guadalajara Jalisco, Taxco Guerrero, Cuernavaca Morelos, Jalapa Veracruz, Mérida Yucatán. Se colectarán muestras de mujeres que acuden al programa de detección oportuna del cáncer (tamizaje). Se colectarán muestras en clínicas de displasias, y un tercer grupo formado por muestras con diagnóstico de CaCu las cuales serán obtenidas de los servicios de patología y oncología. Se plantea colectar 1000 muestras de tamizaje, 200 de clínica de displasias y 100 CaCu por cada centro. En las muestras de tamizaje y clínica de displasias, se realizará la detección de VPH de alto riesgo mediante plataformas validadas para diagnóstico: COBAS 4800 (Roche) y captura de Híbridos CH2 de Qiagen, como parte de la incorporación de pruebas moleculares al tamizaje. En las muestras positivas, se realizará la genotipificación mediante la plataformas como Linear Array (la cual identifica 37 tipos virales de manera simultánea) Y HPV Flow para determinar la presencia de coinfecciones. Se realizará citología en base líquida a las muestras positivas a VPH, para la detección de p16 y Ki-67 como método de cribado. Se analizará la frecuencia, genotipos, presencia de coinfecciones y atribución de los VPH en el desarrollo de lesiones precursoras y CaCu. En las muestras positivas a VPH del grupo control y lesiones precursoras se dará seguimiento para nuevas tomas a los 12, 24 y 36 meses para analizar persistencia viral y presencia de coinfecciones y diagnóstico citológico. En los CaCu se analizará la relación de genotipos y coinfecciones con la sobrevida global ajustado por etapa clínica. El diagnóstico de las lesiones precursoras y el CaCu será confirmado por reporte patológico. Recursos e infraestructura. El proceso de muestras se llevará a cabo en el laboratorio de Oncología Molecular de la UIMEO, el cual cuenta con la infraestructura necesaria para llevar a cabo el proyecto: plataformas para la detección y genotipificación de VPH COBAS 4800, RSC CH2, Linear Array, Inno Lipa, HPV Flow Master Diagnóstica y Ventana, todas ellas automatizadas y con aprobación para diagnóstico (IVD). También contamos con microscopios, centrífugas refrigeradas, termocicladores en punto final y tiempo real, micrótomo, microarreglador de tejidos, incubadoras, agitadores, micropipetas, campanas de flujo laminar y cámaras de electroforesis. Este proyecto cuenta con financiamiento por parte del IMSS, y la industria a través de la Fundación IMSS A.C. aportó pruebas para tamizaje molecular. En cada uno de los centros se cuenta con personal calificado para la toma de muestras y registro de datos clínicos. Experiencia del grupo. La responsable técnico tiene amplia experiencia en biología molecular del cáncer, en particular sobre VPH, y maneja todos las técnicas que se requieren para llevar a cabo este trabajo. El grupo de trabajo está conformado por médicos e investigadores con experiencia en diversas áreas: biólogos moleculares, epidemiólogos, médicos familiares, ginecólogos patólogos y citotecnólogos. El grupo ya ha trabajado en colaboración a partir de la generación de la Red de VPH del IMSS y ha publicado artículos indizados derivados de dicha colaboración. Contribución: a través de este proyecto se llevará a cabo la incorporación de pruebas moleculares para el tamizaje de CaCu en derechohabientes del IMSS. Este estudio contribuirá al conocimiento sobre la prevalencia, tipos y presencia de coinfecciones en distintas regiones de la República Mexicana, así como la contribución de las coinfecciones en el desarrollo de lesiones precursoras y la progresión de CaCu.








